青蒿琥酯调节BCL-2家族蛋白平衡诱发肌成纤维细胞凋亡

摘要

目的 研究青蒿琥酯诱导纤维化核心细胞——肌成纤维细胞线粒体凋亡作用并探索其对BCL-2家族表达的影响.方法 构建人肺肌成纤维细胞模型,采用CCK-8、流式及JC-1方法检测青蒿琥酯处理后人肺肌成纤维细胞的活性、凋亡启动、凋亡状态的变化,RT-qPCR和western blot检测α-SMA和BCL-2家族基因表达情况.结果 人肺成纤维细胞加入TGF-β10 ng/mL刺激48 h成功构建表达α-SMA的人肺肌成纤维细胞模型;青蒿琥酯组细胞活性明显下降(P<0.001),细胞凋亡(Annexin V+)比例明显增加(P<0.001);青蒿琥酯组红色荧光强度明显下降[从(17.58±1.08)降至最低峰(1.28±0.35)],24～36 h降幅最为明显;而对照组红色和绿色荧光强度(JC-1信号)无明显变化.青蒿琥酯组抗凋亡BCL-2 mRNA表达较对照组明显降低(P<0.001),促凋亡BIM(P<0.01)和PUMA、BMF、HRK(P<0.05)mRNA表达升高,而BAX、BAK、BAD、NOXA变化差异无统计学意义.结论 青蒿琥酯通过下调BCL-2,上调BIM、PUMA、BMF和HRK基因的表达,调节线粒体BCL-2家族促凋亡/抗凋亡蛋白表达平衡,触发线粒体凋亡启动,从而诱发人肺肌成纤维细胞凋亡.