热休克蛋白70介导的表没食子儿茶素没食子酸酯抑制埃可病毒9型的活性研究

摘要

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)体外抑制埃可病毒9型(Echovirus 9,ECHO9)的作用机制及其特异性底物热休克蛋白70(Heat shock protein 70,Hsp70)在其中的作用,为埃可病毒抑制剂的天然产物研发提供理论依据.方法 根据细胞毒性实验确定使用的EGCG的最大工作浓度,采用病毒滴度TCID50检测法、细胞毒性检测法、Western blot和实时荧光定量PCR方法(qPCR)分别检测EGCG在体外模型上对ECHO9的增殖、蛋白表达和基因转录的抑制效果.检测RNAi干扰Hsp70的表达后病毒的生长曲线.结果 EGCG对Vero细胞的毒性呈现明显的梯度依赖效应,最大无毒浓度为25μmol/L,且20μmol/L的EGCG浓度下,细胞上清中病毒滴度抑制率达62％;同时Western blot结果显示EGCG使病毒G蛋白受到显著抑制;qPCR对细胞中埃可病毒G蛋白的转录本的检测结果表明EGCG使病毒G蛋白的转录效率下降了85.3％.RNAi干扰Hsp70后,病毒的滴度下降了两个数量级.结论 EGCG体外对ECHO9有较好的抗病毒作用,且可能是通过抑制其特异性底物Hsp70实现的.