抑制pit-1基因表达对垂体生长激素腺瘤生物学行为影响的实验研究

摘要

目的:研究垂体特异转录因子-1(pit-1)反义寡核苷酸(ASODN)对垂体生长激素(GH)腺瘤细胞增殖和细胞凋亡的影响,为以pit-1为靶点治疗GH腺瘤提供理论和实验依据.方法:设计合成硫代磷酸化反义寡核苷酸(PS-ASODN),经脂质体(lipofectin)包裹转染瘤细胞,每隔24 h取样.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ASODN对细胞生长增殖的影响;用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡和周期分布的改变,用免疫组化SABC法、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定经ASODN作用后,pit-1蛋白和pit-1mRNA表达的变化.结果:ASODN组与正义组(SODN)及对照组相比较,48 h、72 h后细胞生长增殖受抑制(P<0.05),96 h、120 h时,差异有非常显著性(P<0.01);ASODN组对细胞凋亡有显著的促进作用,细胞多阻滞于G2/M期.其作用具有序列选择的特异性,在一定的时间范围内,呈时间依赖性.ASODN显著地抑制pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达(均P<0.05).结论:pit-1反义寡核苷酸能够有效地抑制GH腺瘤细胞的生长而促进其凋亡,具有较好的临床应用前景.