荧光定量PCR/熔解曲线分析法快速鉴定葡萄球菌菌种

摘要

目的:建立一种基于葡萄球菌16～23 s rRNA间隔区序列特征的荧光定量PCR/熔解曲线分析鉴定方法.以快速鉴定葡萄球菌菌种.方法:在葡萄球菌16 s rRNA 3'端和23 srRNA 5'端分别设计上、下游引物,用荧光定量PCR方法扩增各个实验菌株的16～23 s rRNA间隔区序列,然后分析各扩增产物的熔解曲线,以确定各个菌种熔解曲线特征,并以此为依据对15株葡萄球菌临床分离株进行鉴定.结果:设计的引物对成功地扩增了葡萄球菌所有实验菌株,对扩增产物的熔解曲线分析可初步鉴定金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌.以VITEK2鉴定结果为标准,荧光定量PCR/熔解曲线分析法鉴定菌种的准确率为67%(10/15),整个实验可在1 h内完成.结论:荧光定量PCR/熔解曲线分析法有望成为临床实验室快速鉴定葡萄球菌菌种的新方法.