实时荧光定量聚合酶链反应检测人锌指蛋白23方法的构建

摘要

目的 建立检测人锌指蛋白23 (human zinc finger 23,ZNF23) 的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR) 技术.方法 采用Primer Express Versions 3.0设计引物及TaqMan探针,检测ZNF23基因.将扩增的ZNF23基因片段纯化后与pMD19-T 载体连接,克隆构建含ZNF23基因片段的重组质粒,作为定量检测ZNF23基因表达的标准品.结果 PCR 扩增产物经测序分析证实为ZNF23特异性片段.本法灵敏度为650 copies/?滋L,线性范围为(6.50×102)~(6.50×107) copies/?滋L,相关系数R2为0.999,扩增效率E为97.28%,批间变异系数为0.78%～7.53%.结论 成功建立了检测人ZNF23的实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好、灵敏度高、通量高.