人小肠三叶因子的克隆及酶联免疫吸附检测

摘要

人小肠三叶因子的cDNA ,克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1中 ,经IPTG诱导后 ,hITF以GST hITF融合蛋白的形式表达 ,融合蛋白占细菌总蛋白的 15%左右。经过Glutathione Sepharose4B亲和柱和Sephacry1S 10 0分子筛层析纯化了hITF。SDS PAGE和氨基酸分析证明得到了hITF纯品。以天然hITF为抗原免疫青紫蓝兔制备了抗血清 ,用纯化的IgG建立了hITF的酶联免疫吸附检测 (ELISA)方法 ,给出了标准工作曲线。应用于纯化过程中样品峰的确立。