抗栓肽和尿激酶原(B链)嵌合体的构建与表达

摘要

通过基因工程重组技术 ,将抗栓肽 (decorsin)基因与尿激酶的B链即scu PA(B)基因用柔性Linker((Gly4Ser) 3 )融合在一起 ,构建新的嵌合体基因dscuPA(B) ,在大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中通过IPTG诱导表达 ,并考察了重组质粒在Rosetta(DE3)plysS在传代中的分离稳定性。该融合蛋白在大肠杆菌中是以包涵体的形式存在 ,对包涵体进行变性及复性后 ,并通过Zn2 + 螯合柱和SP阳离子交换柱进行纯化。质谱分析表明分子量为 33 735kD ,与理论值相符。目的蛋白质的纯度可达90 %。纤维蛋白平板法测得嵌合分子的比活为 90 0 0 0IU mg ,与scuPA 32k的比活相近。体外血小板聚集实验表明融合蛋白有较强的抑制血小板聚集的功能 ,抑制常数IC5 0为 0 31 μmol L。以上这些结果表明 ,该融合蛋白不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 。