幽门螺杆菌硫氧还蛋白-1基因克隆及其重组蛋白表达与活性测定

摘要

目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,构建含有该目的基因的原核细胞表达载体,表达纯化该蛋白,并检测该蛋白活性。方法:以Hp国际标准菌株26695的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法扩增Hp Trx1的cDNA,连接至pEASY-T1载体构建成pEASY-T1-Hp Trx1。对pEASY-T1-Hp Trx1进行双酶切后将目的片段连接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重组质粒,并在大肠杆菌BL21 plys S中进行表达。应用镍柱亲和层析纯化重组的Hp Trx1蛋白,并检测其二硫键还原酶的活性。结果:测序结果显示Hp Trx1 cDNA成功连入pET-30a质粒,且与GenBank(HP0824)完全一致。含质粒pET-30a-Hp Trx1的大肠杆菌BL21 plys S成功表达出Hp Trx1蛋白,活性检测显示重组Hp Trx1蛋白具有二硫键还原酶的活性。结论:成功构建原核表达载体pET-30a-Hp Trx1,并表达、纯化出有活性的Hp Trx1蛋白,为进一步研究Hp Trx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础。