大菱鲆TLR14基因的克隆和相关功能研究

摘要

Toll样受体14(Toll-like receptor 14,TLR14)存在于非哺乳动物中,是先天性免疫系统中的模式识别受体。为探究大菱鲆(Scophthalmus maximus)TLR14的免疫功能,本研究克隆了大菱鲆TLR14基因(SmTLR14),研究了其免疫应答表达、蛋白质亚细胞定位和对免疫相关基因表达的影响。研究表明:SmTLR14基因长度为12708 bp,具有4个外显子和3个内含子,编码877个氨基酸。预测的蛋白含有1个信号肽序列,23个LRR结构域,1个跨膜结构域和1个TIR结构域(含有3个保守的box结构)。系统进化树显示,大菱鲆TLR14和牙鲆的TLR14具有最高的相似性。组织表达分析显示,SmTLR14在所有被检测的大菱鲆组织中均表达,其中在脾脏中表达量最高。脂多糖刺激后,SmTLR14在免疫组织(鳃、头肾、脾脏)中的表达被显著上调,而肽聚糖刺激后,其在各组织的表达变化不明显或被显著抑制。亚细胞定位显示,大菱鲆TLR14蛋白定位在大菱鲆肾细胞的细胞质中。用脂多糖刺激过表达SmTLR14的TK细胞,发现炎性细胞因子TNF-α、IL^(-1)β和IL-8的表达量被显著上调,而抗病毒因子IFN-1、IRF-1和IRF-3的表达量只轻微上调。研究结果表明,SmTLR14在大菱鲆抗菌免疫中发挥着重要作用。