由猪囊胚内细胞团分离胚胎干细胞的研究

摘要

以PMEF为饲养层培养猪7～9日龄囊胚分离ES细胞,ICM初次传代时间为4～7 d,ES细胞传代时间为4～5 d,ES细胞传至1～5代的胚胎数分别为12(18.8%),8(12.5%),5(7.8%),3(4.7%),2(3.1%),并进行体外分化和AKP染色鉴定.对影响猪ES细胞分离与克隆的因素进行比较,结果表明:(1) 9和14日龄小鼠胎儿PMEF饲养层培养9日龄猪囊胚,贴壁率(83.3%,88,9%),ICM形成率(75.0%,77.8%)和1代ES细胞克隆率(25.0%,22.2%)无显著性差异(P>0.05).(2) 7,8和9日龄胚胎随胚龄增加,胚胎贴壁率(5.9%,57.1%,87,9%)和ICM形成率(0.0%,28.6%,81.8%)升高,差异显著(P<0.01).(3) 9日龄囊胚直径0.8～1.2 mm培养36～48 h贴壁,贴壁率100%,ICM形成率100%;直径>1.2 mm囊胚贴壁时间为48～72 h,贴壁率57.1%,ICM形成率57.1%,差异显著(P<0.05).去除直径>1.2 mm囊胚部分滋养层细胞培养36～48 h,贴壁率91.7%,ICM形成率83.3%;(4) 添加外源LIF没有提高贴壁率(86.4%,90.9%;P>0.05)和ICM形成率(81.8%,81.8%;P>0.05).