枯草芽孢杆菌AmyX基因信号肽性能优化研究

摘要

从枯草芽孢杆菌1A747菌株基因组克隆AmyX基因信号肽序列,构建枯草芽孢杆菌分泌表达载体pYGAmyX,转化枯草杆菌WB700得WB700(pYGAmyX).采用重叠PCR技术,将AmyX基因信号肽突变,使其N端正电荷增加,H区疏水性降低,利用突变后信号肽序列构建枯草杆菌分泌表达载体pYGMUT,转化枯草杆菌WB700得WB700(pYGMUT).对WB700(pYGAmyX)和WB700(pYGMUT)的表达产物进行检测,研究AmyX基因信号肽突变对枯草杆菌蛋白分泌途径的影响.结果表明,WB700(pYGAmyX)和WB700(pYGMUT均能表达β-半乳糖苷酶,WB700(pYGAmyX)的最高胞外酶活性达2 300 U,WB700(pYGMUT)的最高酶活性达5 200 U.结果表明AmyX基因信号肽突变后构建的表达载体pYGMUT分泌表达β-半乳糖苷酶明显提高,说明β-半乳糖苷酶通过枯草杆菌Tat途径分泌表达.