山羊子宫中LHR基因片段的克隆及半定量RT-PCR检测方法的建立

摘要

【目的】进一步研究处于发情周期不同阶段的济宁青山羊子宫中黄体生成素受体（LHR）mRNA表达量的变化，为探讨其对山羊生殖内分泌机制的作用规律提供理论依据。【方法】以GAPDH为内参照基因，从济宁青山羊的子宫组织中提取总RNA，用RT—PCR方法扩增目的基因，进行克隆测序，并对半定量RT—PCR反应体系进行了优化。【结果】获得了济宁青山羊LHR mRNA的部分序列，长度约为286bp，与已报道的GenBank中羊的I。HRmRNA（序列号为AF379199）41～326bp序列同源性为100％。以此基因片段的阳性克隆为基础优化的半定量RT—PCR体系为：LHR基因的适宜循环数为30个，内参照GAPDH基因的循环数为26个，Mg^2＋浓度均为1．5mmol／L。【结论】克隆了山羊LHRmRNA的部分序列，并建立了优化的半定量RT—PCR体系。