摇瓶中重组大肠杆菌生产人γ-干扰素工艺优化

摘要

目的优化大肠杆菌生产重组人γ-干扰素摇瓶发酵工艺条件，分析摇瓶发酵过程中的制约因素。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对工程菌生产rhlFN-γ和质粒稳定性的影响，及优化条件下工程茵发酵参数。结果最佳条件：种子液为OD6000．5—1．5，接种量为6％，培养至OD600为1．5时42℃诱导表达4h。在此条件下，在摇瓶中使用M9II培养基时，质粒无丢失，摇瓶中rhlFN-γ的表达量占菌体总蛋白的43．2％，光密度为3．3。对发酵过程中总糖、还原糖、总氮和pH的分析表明，发酵过程中培养基中碳源、氮源丰富，而溶解氧的不足和pH值偏酸性可能是整个培养过程的限制性因素。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好，为rhlFN-γ的大规模生产提供可靠的放大依据。