雷公藤RNA提取方法选择与优化

摘要

建立提取完整性好、丰度高的雷公藤RNA的方法,是后续分子生物学试验的必要前提.试验以雷公藤叶、根、愈伤组织和悬浮细胞为材料,比较亚精胺法、SDS法、CTAB法和异硫氰酸胍法从雷公藤组织中提取的RNA,并对最佳方法进行优化.结果表明:SDS法从雷公藤组织中获得RNA片段完整性较好,但丰度较低;对该方法的操作步骤进行删减,并在2次氯仿/异戊醇去除蛋白质和多糖的过程中进行不同时间和程度的振荡提取,得到的RNA较优化前丰度更高,完整性更好,28S rRNA条带的亮度约为18S rRNA条带亮度的2倍,经过紫外分光光度计测定A260/A280比值在1.8～2.0之间,A260/A230比值在1.9～2.1之间.用优化的SDS法提取的雷公藤各组织RNA均具有很好的反转录活性,完全能满足后续RT-PCR、全长基因的克隆和Northern blotting分析等分子生物学研究.