毛果杨叶肉原生质体分离及BpFLA20基因亚细胞定位

摘要

以毛果杨(Populus trichocarpa)幼嫩叶片为材料,进行原生质体分离,结果表明,酶解液(20 mL)的组成为1.5％纤维素酶R10+0.4％离析酶+2 mL 0.2 mol/L MES+10 mL 0.8 mol/L甘露醇+0.2 mL 2 mol/L KCl,所得原生质体为2×105个细胞/mL.在此基础上,对白桦中一个FLA(fasciclin-like arabinogalactan-protein)基因BpFLA20进行了亚细胞定位研究.系统进化分析显示,BpFLA20蛋白在序列上与次生壁合成相关的AtFLA11和AtFLA12蛋白相近.以白桦的根、茎、叶cDNA为模版,进行了荧光定量PCR实验,结果表明该基因在根中的表达量最高,在叶中的表达量最低.以本研究分离的毛果杨原生质体为受体,利用PEG介导的原生质体瞬时转化法将35S::FLA20-GFP融合表达载体转化到毛果杨原生质体中进行亚细胞定位研究,结果显示,BpFLA20蛋白定位于细胞膜.