双荧光素酶报告技术验证miR-6857-3p对SP110基因的靶向调控作用

摘要

目的:通过双荧光素酶报告系统验证miR-6857-3p对SP110基因的靶向调控作用.方法:从人巨噬细胞基因组中获取SP110基因的3'UTR序列,构建SP110基因的3'UTR野生型及SP110的3'UTR突变型双荧光素酶报告基因载体,分别将双荧光素酶报告质粒(psiCHECK-2-SP110-3'UTR和psiCHECK-2-SP110-3'UTR-6857mut)和miRNA质粒(miR-6857-3p mimic、miR-4772-3p mimic、miR-4659b-3p mimic和miRNA mimic nc)共转染到293T细胞,进行荧光活性测定.结果:与对照组相比,携带miR-6857-3p mimic和SP110野生型3'UTR的构建体的相对荧光素酶活性产生明显下降(P＜0.001),SP110突变型3'UTR的构建体的相对荧光素酶活性下降没有统计学意义P＞0.05).结论:miR-6857-3p可以直接靶向SP110的3'UTR序列,SP110是miR-6857-3p的直接靶基因.