Gabrg2基因敲除促进MMP9表达升高在遗传性癫痫伴热性惊厥附加症中的机制研究

摘要

目的 探讨γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid,GABA)A型受体γ2亚基(Gabrg2)敲除引起基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP9)升高的潜在机制及其在遗传性癫痫伴热性惊厥附加症(genetic epilepsy with febrile seizures plus,GEFS+)中的作用.方法 利用小鼠海马神经元细胞系作为体外实验细胞模型,Gabrg2基因未敲除组和敲除组分别作为野生组(wild type,WT)和敲除组(knockout,KO).采用RT-qPCR和Western blot技术验证Gabrg2基因敲除效率;CCK-8试剂盒检测Gabrg2基因敲除对细胞存活率的影响;RT-qPCR检测PKA、MEK1、ERK1及MMP9 mRNA的表达水平;Western blot技术分析MAPK途径上相关关键因子及MMP9蛋白的表达情况;免疫荧光技术分析MMP9的表达情况.结果 与WT组相比,KO组中GABRG2蛋白(P0.05),ERK1和MMP9的mRNA表达水平升高(P均<0.05);Western blot结果显示,与WT组比较,KO组p-PKA、p-MEK1/2、ERK1/2、MMP9蛋白表达升高(P均<0.05);KO组细胞中MMP9荧光强度增高(P<0.05).结论 Gabrg2基因敲除可通过激活MAPK途径促使MMP9表达上升,这可能是Gabrg2基因敲除后促进癫痫发生的一种新的潜在机制.