不同浓度β-甘油磷酸盐对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响

摘要

目的 探寻β-甘油磷酸盐诱导原代培养人脐静脉平滑肌细胞(HUSMC)钙化的适宜浓度.方法 采用原代培养人脐静脉平滑肌细胞,根据培养液中β-甘油磷酸盐浓度不同依次分为8组:正常对照组、10mM组、12mM组、14 mM组、16 mM组.以更换培养液当天记为第1天,培养10d,von kossa染色观察细胞钙沉积情况、显微图像分析法测量钙化阳性细胞百分比、比色法检测细胞内钙含量和碱件磷酸酶活性.结果 对照组SMC银染无钙结节,显微图像分析阳性细胞为(0.1060±0.05)%;12mM组SMC银染可见明显钙结节存在,钙化阳性细胞数为(4.7009±1.35)%,钙含量和碱性磷酸酶活性较对照组明显升高(P<0.05).10mM组、16mM组、20mM组、30mM组与对照组相比钙含量和碱性磷酸酶活性差异无统计学意义(P>0.05),但10mM组、16mM组钙化阳性细胞百分比升高明显(P<0.05),20mM组、30mM组与对照组相比钙化阳性细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05);40mM组钙含量和碱性磷酸酶活性明显降低(P<0.001),灰度扣描钙化阳性细胞随之降低.结论 12mM β-甘油磷酸盐可刺激人脐静脉平滑肌细胞出现钙盐沉积,且人脐静脉SMC钙化对β-甘油磷酸盐尤浓度依赖性.