类风湿性关节炎滑膜细胞中DDR2相互作用蛋白的筛选

摘要

目的 筛选盘状结构域受体(discoidin domain receptors 2,DDR2)的相互作用蛋白.方法 原代培养类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs).用人DDR2过表达腺病毒(Ad5-DDR2)感染FLSs,上调DDR2的表达.采用Ⅱ型胶原诱导的方法活化FLSs细胞膜上的DDR2;提取细胞总蛋白,通过小鼠来源的DDR2抗体免疫沉淀FLSs中的DDR2蛋白复合物;双向电泳分离抗原抗体复合物,质谱分析确认DDR2活化前后的差异蛋白.结果 Ad5-DDR2感染RA FLSs后,Western-blot结果显示细胞中DDR2表达水平显著上调.双向电泳分离DDR2免疫沉淀复合物,考马斯亮蓝染色显示胶原刺激前后,DDR2免疫复合物存在7个差异蛋白点.质谱分析及生物信息学分析显示,DDR2相互作用蛋白主要包括波形蛋白(vimentin)、膜脂联蛋白A2(Annexin A2)、免疫球蛋白和肌动蛋白等.结论 筛选获得了两个可能与RA病程相关的DDR2相互作用蛋白——波形蛋白和膜脂联蛋白2,为DDR2-MMPs通路作用机制的阐明奠定了基础.