pEGFP-N1-omp25荧光真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的 克隆布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因并构建荧光真核表达载体pEGFP-N1-omp25,检测其在大鼠脑内的表达.方法 根据Genebank中omp25基因的核苷酸序列,设计并合成1对引物,以布鲁氏杆菌总基因组DNA为模板,进行PCR扩增得到omp25基因片段,并将omp25基因片段及质粒pEGFP-N1分别进行进行酶切、体外连接,使其定向重组,构建其重组质粒.将制备的重组质粒经侧脑室注射至大鼠,检测pEGFP-N1-omp25在大鼠脑内的表达.结果 PCR扩增出642bp大小的片段,挑取的LB固体培养基上的单菌落经菌液PCR、酶切、测序表明成功构建了pEGFP-N1-omp25荧光真核表达载体.质粒经大鼠侧脑室注射后,脑组织冰冻切片可见荧光表达.结论 采用体外重组技术,成功构建了布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因的真核表达载体,且重组质粒在大鼠脑组织内成功表达.