分泌型Klotho蛋白抑制肾间质纤维化的机制研究

摘要

目的 研究分泌型Klotho蛋白抑制肾间质纤维化的机制,为治疗慢性肾脏病提供理论基础和新思路.方法 通过单侧输尿管梗阻(UUO)诱导C57BL/6小鼠肾纤维化,并分5组处理:假手术[Sham+磷酸盐缓冲液(PBS)]组、模型(UUO+PBS)组、UUO+Klotho组、UUO+Klotho+胰岛素组、UUO+Klotho+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组.检测小鼠左肾组织活性氧水平,并用HE及Masson染色评估肾脏病理改变及纤维化程度.实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法以及免疫荧光化学检测肾组织中超氧化物歧化酶2(SOD2)、纤连蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,此外用蛋白免疫印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、AKT、磷酸化磷脂酰肌醇(-3)激酶(p-PI3K)、PI3K、胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达水平.结果 成功建立了UUO小鼠模型.与UUO+PBS组比较,UUO+Klotho组小鼠肾组织的纤维化缓解(P<0.001),且肾纤维化标志物纤连蛋白和α-SMA mRNA及蛋白的表达降低(P均<0.001),保护因子SOD2 mRNA及蛋白表达升高(P均<0.001).胰岛素及IGF-1可激活肾组织IRS-1/PI3K/AKT通路并破坏Klotho对肾脏的保护作用(P均<0.001).结论 Klotho通过抑制胰岛素下游IRS-1/PI3K/AKT信号通路从而缓解肾脏的纤维化.