从癫痫模型大鼠海马神经元中克隆caspase 3的新底物PIAS1

摘要

目的从癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中克隆caspase-3的新底物.方法制作癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库;PCR获得caspase-3的P12和P17两亚基,然后分别定向插入pBridge质粒,构建三杂交诱饵载体;进行酵母三杂交筛库.结果建立成功癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了大鼠caspase-3基因的酵母三杂交诱饵载体,并通过了caspase-3与eIF2α之间的相互作用验证,筛库获得caspase-3的新底物PIAS1.结论用酵母三杂交系统寻找caspase-3下游底物具有可行性,从癫痫模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase-3的新底物PIAS1,为进一步研究caspase-3在癫痫发作引起的海马损伤中的作用奠定了基础.