吡那地尔对癫痫持续状态大鼠海马神经元的保护作用及对Bcl--2、Caspase--3表达的影响

摘要

目的:探讨吡那地尔对癫痫持续状态(SE)大鼠海马神经元的保护作用以及对Bcl-2、Caspase-3表达的影响。 方法:选健康雄性成年Wistar大鼠54只，随机化分为对照组（N组n=6只）、癫痫组（SE组n=24只）、吡那地尔预处理组（Pin组n=24只），后两组分别在SE后按12h、24h、72h、5d分为四个亚组，每6只为一亚组。采用氯化锂—匹罗卡品法诱发SE大鼠模型，造模时，给予SE组大鼠腹腔注射氯化锂125mg/Kg，20小时后腹腔注射匹罗卡品30mg/kg;给予Pin组大鼠腹腔注射氯化锂125mg/Kg，20小时后腹腔注射匹罗卡品30mg/kg，于注射匹罗卡品前30分钟给予腹腔内注射吡那地尔1 mg/kg;同时间点给予N组大鼠腹腔注射等容积生理盐水。观察大鼠痫性发作时间和行为学改变;在SE后相对应时间点，对实验组大鼠断头取脑，对海马组织行HE染色，光镜下观察凋亡细胞形态学变化;用TUNEL法检测实验组大鼠海马神经元凋亡数;通过免疫组化法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。采用SPSS17.0对实验数据行统计分析，且P＜0.05时，差异有统计学的意义。 结果:N组在SE后12h时TUNEL、Bcl-2和Caspase-3阳性细胞有微量基础表达， (1) SE组及Pin组在12h可见TUNEL阳性细胞，24h逐渐增多，72h达到高峰，持续至5d，与N组比较，较N组明显增多(p＜0.05);按不同时间点比较，Pin组较SE组明显减少(p＜0.05); (2) SE组及Pin组在12h可观察到Caspase-3阳性细胞，24h达高峰，72h逐渐下降，持续至5d，与N组比较，较N组明显增多(p＜0.05);按不同时间点比较，Pin组较SE组表达量减低(p＜0.05)。 (3)SE组及Pin组在12h可见Bcl-2表达到高峰，24h开始下降，72h持续减低至5d将至基础量水平，与N组比较，较N组明显增多(p＜0.05);按不同时间点比较，Pin组较SE组表达量增高(p＜0.05); 结论: 1.癫痫持续状态后Bcl-2和Caspase-3的表达均发生变化，证实二者均参与了癫痫持续状态发生后海马神经元损伤过程; 2.吡那地尔可能通过上调Bcl-2的表达，抑制Caspase-3的释放，减轻癫痫持续状态后的脑损伤; 3.吡那地尔对大鼠癫痫持续状态后神经元损伤的保护作用与抗凋亡有关。

目录

声明

摘要

英文缩略词汇表

前言

1．材料与方法

1．1 实验动物及主要试剂仪器

1．1．1 实验动物

1．1．2 实验药品与试剂

1．1．3 实验仪器

1．2 实验方案

1．2．1 癫痫持续状态模型的制备

1．2．2 实验过程

1．3 检测方法

1．3．1 痫性发作级别及行为观察

1．3．2 标本处理

1．4 结果处理及统计方法

2．实验结果

2．1 不同实验组SE后大鼠行为观察比较

2．2 不同实验组HE染色比较

2．3 不同时间点各组TUNEL阳性细胞数比较

2．4 不同时间点各组Caspase-3阳性细胞数比较

2．5 不同时间点各组Bcl-2阳性细胞数比较

附录

讨论

结论

参考文献

综述 难治性癫痫机制的相关性研究

个人简介

致谢