携带人血红素加氧酶-1基因重组腺病毒的构建及其在大脑皮层神经元中的表达

摘要

目的 构建人血红素加氧合酶-1( hHO-1)基因的重组腺病毒,并研究其感染大脑皮层神经元的效率.方法 采用基因克隆技术,将hHO-1基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-IRES-hrGFP中,构建pShuttle-hHO-1-IRES-hrGFP质粒,利用细菌BJ5183将穿梭质粒与pAdEasy-1进行重组,获得重组的腺病毒质粒.线性化的腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增.采用CsCl梯度离心进行病毒纯化.获得的腺病毒感染大脑皮层神经元,观察其感染效率和hHO-1表达水平.结果 通过酶切鉴定证明腺病毒载体构建成功,包装出携带hHO-1基因的腺病毒,病毒滴度为2.0×1010pfu/ml,获得的腺病毒对大脑皮层神经元的感染效率高于95%以上.结论 成功地利用细菌内同源重组方法 构建了携带hHO-1基因的腺病毒,并能够在大脑皮层神经元中高效地表达,为利用HO-1进行基因治疗提供了材料.