半巢式PCR一步法扩增伤寒患者单核细胞中伤寒沙门菌DNA

摘要

建立适用于临床检测血中伤寒沙门菌(S.typhi)DNA扩增方法.分离患者单核细胞,加热裂解制备模板DNA,半巢式PCR一步法扩增S.typhi鞭毛基因.结果7例血培养阴性而临床拟诊伤寒及38例由血培养阳性伤寒患者单核细胞均获得了458bp的扩增产物,其他28例发热待查的患者单核细胞无扩增产物出现.连续1 : 10稀释S.typhi DNA最低可检测到40fg DNA(约10个细菌).slot-blot探针杂交证实458bp扩增产物是S.typhi鞭毛素基因.该法是一项简便、省时、灵敏和特异的实验室诊断伤寒的新技术,尤其对培养阴性的伤寒患者可提供早期、快速的实验室诊断.