黄柏酮通过影响线粒体功能抑制肾上腺皮质瘤细胞皮质酮合成的研究

摘要

目的 研究黄柏酮对肾上腺皮质激素合成与分泌的影响.方法 体外培养Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞,采用2.5～160μmol/L黄柏酮干预细胞24h,运用MTT法检测细胞活性;以80μmol/L黄柏酮处理细胞24h后采用流式细胞术检测细胞周期,共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜变化;以ELISA法检测细胞分泌液皮质酮含量;以40～160μmol/L黄柏酮干预细胞24h,80μmol/L黄柏酮干预细胞24～48h,运用qPCR法检测皮质酮合成酶mRNA表达,Western blot检测其蛋白表达.结果 与对照组比较,2.5～40μmol/L黄柏酮对细胞的抑制率约为35％(P<0.05),160μmol/L黄柏酮对细胞的抑制率为60％以上(P<0.01).黄柏酮导致G1期细胞显著增加并促进线粒体膜亮度增强(P<0.05),同时显著抑制线粒体膜Mfn1、Mfn2蛋白表达以及皮质酮分泌(P<0.05).进而发现,40～160μmol/L黄柏酮显著抑制Cyp11a1、Cyp11b1、Hsd3b2、SF-1基因表达(P<0.01),160μmol/L黄柏酮显著增强Star、Cyp21a1、Nr4a1、Nr4a2基因表达(P<0.01);80μmol/L黄柏酮持续给药48h内,均显著抑制Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Hsd3b2基因表达(P<0.01),并抑制StAR、CYP11A1蛋白表达,然而促进Star基因表达(P<0.01).结论 黄柏酮抑制肾上腺皮质细胞皮质酮合成过程,可能与其阻滞细胞周期及影响线粒体膜上类固醇激素合成酶表达有关.