马立克病疱疹病毒致瘤株基因组IRL区Bam H I I2和L片段内一特异性cDNA的分离与鉴定

摘要

目的　了解马立克病疱疹病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株Ｂａｍ ＨＩＬ片段在ＭＤＶ致瘤毒株京－１株（中国特有的地方株）所诱导的淋巴肿瘤组织中转录状况。方法　从人工感染ＭＤＶ致瘤株京－１株发病鸡内脏淋巴肿瘤组织中分离ｍ ＲＮＡ，根据已发表的ＭＤＶ肿瘤候选基因ｍ ｅｑ 基因序列和我们已测定的强毒ＧＡ株Ｂａｍ ＨＩＬ片段序列，设计两段寡核苷酸引物，以此ｍ ＲＮＡ为模板经逆转录合成ｃＤＮＡ，应用ＰＣＲ法进行目的基因扩增。用非放射性Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ 分别标记ＧＡ株基因组Ｂａｍ ＨＩＩ２和ＬＤＮＡ片段，制成核酸探针，分别与ＰＣＲ产物作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交鉴定。结果　逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增的ｃＤＮＡ大小约７３０ ｂｐ，该ｃＤＮＡ能同时与上述两探针发生免疫呈色反应。结论　①ＭＤＶ ｍ ｅｑ基因的转录可以延伸到其右侧的Ｂａｍ ＨＩＬ片段区；②Ｂａｍ ＨＩＬ区在ＭＤＶ致瘤株京－１株所诱导的淋巴肿瘤组织中可发生转录。