BMP-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的细胞形态学及生物学特性观察

摘要

目的探讨骨形态发生蛋白2（BMP-2）对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导成脂分化后BMSCs细胞形态学的影响,确定BMP-2抑制BMSCs成脂分化的优选浓度。方法抽取大鼠的骨髓,体外用贴壁培养法获得原代BMSCs,流式细胞仪检测P2细胞表面抗原标志物;实验取第二、三代细胞,设计5个实验组及1个对照组：实验组第一阶段用成脂诱导液诱导3d,第二阶段在成脂诱导液中分别添加BMP-2 0.5、5.0、50.0、100.0、200.0ng·mL-1继续诱导14d;而对照组始终用BMSCs培养基培养。各组经诱导后第17天用油红O染色,观察细胞脂滴染色情况及检测细胞成脂OD值,显微镜下观察细胞形态的变化。结果流式细胞术结果显示P2细胞表达CD44、HLA-ABC、CD105分别为95.5%、96.8%和92.0%,而阴性抗原CD34、CD45表达分别为0.683%和0.377%。油红O染色图片显示：BMP-2在0.5~50.0ng·mL-1的质量浓度下脂滴数呈现增多趋势,而在100.0~200.0ng·mL-1的质量浓度下脂滴数呈下降趋势。实验组BMP-2 50.0ng·mL-1的脂肪定量OD值〉BMP-2 0.5ng·mL-1的脂肪定量OD值,而BMP-2 200.0ng·mL-1的脂肪定量OD值0.05）。结论通过贴壁培养可获得高纯度BMSCs。BMP-2质量浓度低于100ng·mL-1时,具有诱导BMSCs成脂分化的能力;BMP-2质量浓度超过100ng·mL-1,则可以抑制BMSCs成脂分化,从而减少大鼠脂肪细胞的形成。