单克隆人胰腺干细胞分离培养体系的建立

摘要

本研究探讨了建立单克隆人胰腺干细胞分离培养体系及单克隆人胰腺干细胞系,对一些影响干细胞增殖的因素进行了分析。无菌取人流产胎儿胰腺组织。切碎至1 mm^3,0.1%Ⅳ型胶原酶消化。低糖DMEM、10%FBS、3.7g/L NaHCO_3、0.08 g/L青霉素及0.1 g/L链霉素培养液贴壁培养细胞。2.5 g/L胰蛋白酶+0.4g/L EDTA消化传代。克隆环筛选单克隆干细胞,培养液中添加10 ng/mL EGF,扩增单克隆干细胞。采用核型分析法检测干细胞染色体,MTT法测定干细胞生长曲线。胶原酶消化胰腺组织.获得单个细胞和细胞团。贴壁培养,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长。胰蛋白酶消化传代,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化。克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞。扩增培养。1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺组织干细胞建系,传50代。染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞。细胞生长曲线显示培养1-4 d,干细胞生长缓慢,5-6 d,进入倍增期。培养液中添加15%FBS,干细胞增殖较快,再添加15 ng/mL EGF或10 ng/mL IGF-Ⅱ,干细胞增殖更快。研究结果表明应用本实验建立的细胞分离培养体系获得了单克隆人胰腺干细胞系。