单细胞克隆人胚胎干细胞系的建立及其生物学特性的鉴定

摘要

目的 建立单细胞克隆人胚胎干细胞系,并对其生物学特性进行鉴定.方法 采取分离自人囊胚内细胞团并传代20代的细胞,用胰酶消化将细胞分散成单细胞悬液,将单个细胞接种至96孔板,生长出的细胞集落用胶原酶消化传代,采用细胞化学法和免疫荧光法检测细胞表面标志物;采用常规G带法分析细胞染色体核型;将细胞接种至严重联合免疫缺陷小鼠后腿肌肉内,观察细胞多向分化潜能.结果 接种的96个细胞生长出2个细胞集落,扩增建立了2个单细胞克隆人胚胎干细胞系,稳定增殖了12个月,传代48代.细胞呈集落状生长,细胞核大、核仁明显;具有稳定的46XX核型;细胞的碱性磷酸酶、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)4、肿瘤识别抗原(TRA)1-60、TRA-1-81等特征性细胞表面标志物呈阳性;接种至严重联合免疫缺陷小鼠后腿肌肉内的细胞,形成了包含神经组织、软骨组织、鳞状上皮组织及柱状上皮组织等来源于3个胚层组织细胞的畸胎瘤.结论 本研究成功建立了单细胞克隆人胚胎干细胞系,其生物学特性稳定.