缺氧诱导的结直肠癌外泌体通过激活PTEN/PI3 Kγ信号通路介导巨噬细胞极化

摘要

目的:探究缺氧条件下,结直肠癌细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响及机制.方法:差速离心法提取正常条件下和缺氧条件下结直肠癌细胞HT-29所分泌的外泌体(HT-29 N-exo和HT-29 H-exo),透射电镜和Western blot鉴定外泌体,荧光显微镜下观察外泌体的摄取.将U937细胞与100 ng/mL的PMA共孵育的同时分别与1μg/mL的HT-29 N-exo和HT-29 H-exo以及等体积的PBS共孵育,记为PBS组、HT-29 N-exo组、HT-29 H-exo组.qRT-PCR检测各组细胞CD163、IL-10、IL-1Rα、TGF-β1、CCL2、TNF-αmRNA的表达,Elisa检测各组细胞IL-10和TNF-α 分泌,流式细胞术鉴定各组细胞CD163和CD11b表达,Western blot检测各组细胞PTEN/PI3Kγ信号通路激活情况.结果:差速离心法所提取的外泌体符合其结构和生物学特征,并且可被U937细胞摄取;相比于HT-29 N-exo组,HT-29 H-exo组细胞CD163、IL-10、IL-1Rα、TGF-β1、CCL2表达显著增加(P<0.05),IL-10分泌显著增加,TNF-α 表达以及分泌显著减少(P<0.01),CD163+CD11b+巨噬细胞数显著增加(P<0.001),PTEN/PI3Kγ信号通路显著激活(P<0.001).结论:缺氧条件下结直肠癌细胞外泌体能够显著促进巨噬细胞M2型极化,其机制为激活PTEN/PI3Kγ信号通路.