人FL基因表达载体的构建及其体内外生物活性的研究

摘要

目的:构建人Flt3配基的胞外区表达载体pCDNA3FL,并在体内外对其表达率及活性进行检测.方法:从健康人单核细胞中反转录PCR扩增FL cDNA胞外区片段,并进行测序,构建表达载体pCDNA3FL,测定pCDNA3FL转染H22细胞后及经小鼠尾静脉注射后hFL表达量.结果:测序结果表明,所扩增、克隆的靶序列正确,Western结果证实pCDNA3FL能正确表达hFL蛋白.ELISA结果表明表达载体pCDNA3FL在体外H22细胞中的瞬时表达量为5.9ng/ml.小鼠经尾静脉注射pCDNA3FL载体后血浆中的hFL蛋白最高含量为36μg/ml,外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD34+细胞亚群的比率均有不同程度的提高.结论:成功构建了表达载体pCDNA3FL,为构建肿瘤细胞瘤苗创造了条件.