DKK1对AGEs/TNF-α微环境牙周膜干细胞骨向分化能力的影响

摘要

目的 研究Wnt糖基化终末产物(AGEs)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)模拟糖尿病伴牙周炎微环境时,Wnt信号通路因子DKK1对牙周膜干细胞(PDLSCs)骨向分化能力的影响.方法 采用组织块酶消化法培养人PDLSCs;采用流式细胞仪进行PDLSCs间充质干细胞表面分子鉴定;采用重组外源性AGEs/TNF-α模拟糖尿病伴牙周炎微环境;将实验组分为对照组(PDLSCs组)、AGEs/TNF-α模拟糖尿病伴牙周炎微环境组(AT-PDLSCs组)及DKK1处理AGEs/TNF-α模拟糖尿病伴牙周炎微环境组(D+AT-PDLSCs组);采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测成骨相关基因mRNA及蛋白的表达量.结果 采用组织块酶消化法成功培养出牙周膜来源的细胞.经流式细胞仪检测,细胞阳性表达STRO-1、CD271、CD146、CD44、CD90,阴性表达CD45.碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色表明,AT-PDLSCs组的成骨能力受到抑制.RT-PCR检测结果表明,AT-PDLSCs组Runx2、ALP表达量最低,D+AT-PDLSCs组表达量高于AT-PDLSCs组,PDLSCs组表达量最高.Western blotting检测结果表明,Runx2及Osterix表达水平趋势与RT-PCR结果相一致.结论 AGEs/TNF-α模拟的糖尿病伴牙周炎PDLSCs骨向分化能力明显受损,D+AT-PDLSCs组PDLSCs骨向分化潜能可逆转,DKK1介导的Wnt通路可作为糖尿病伴牙周炎的潜在治疗靶点.