骨向分化

摘要： 背景:长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-DANCR可调节包括骨代谢的多个生物学过程.课题组基因芯片结果显示糖尿病骨质疏松小鼠脂肪组织中LncRNA-DANCR显著高表达.目的:探究LncRNA-DANCR通过Wnt/β-catenin信号通路对糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨能力的影响.方法:分离培养糖尿病骨质疏松小鼠和正常对照小鼠脂肪干细胞,成骨诱导3 d后,采用qRT-PCR、Western blot检测LncRNA-DANCR、Wnt信号分子β-catenin以及成骨转录因子(RUNX2、OPN)的表达.设计LncRNA-DANCR特异性siRNA转染糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞,成骨诱导3 d后,采用qRT-PCR、Western blot和碱性磷酸酶染色检测Wnt信号分子β-catenin、成骨转录因子(RUNX2、OPN)的表达以及成骨能力改变.结果 与结论:①成骨诱导3 d后,糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞的LncRNA-DANCR表达水平显著高于正常对照小鼠脂肪干细胞,Wnt信号分子β-catenin和成骨转录因子RUNX2、OPN的表达显著低于正常对照小鼠脂肪干细胞;②siRNA转染糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨诱导3 d后,β-catenin以及RUNX2、OPN显著高表达,成骨能力增强;③结果 表明,LncRNA-DANCR通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞的成骨能力,沉默LncRNA-DANCR可恢复其成骨能力.

摘要： 背景:长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-DANCR可调节包括骨代谢的多个生物学过程。课题组基因芯片结果显示糖尿病骨质疏松小鼠脂肪组织中LncRNA-DANCR显著高表达。目的:探究LncRNA-DANCR通过Wnt/β-catenin信号通路对糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨能力的影响。方法:分离培养糖尿病骨质疏松小鼠和正常对照小鼠脂肪干细胞,成骨诱导3 d后,采用q RT-PCR、Western blot检测LncRNA-DANCR、Wnt信号分子β-catenin以及成骨转录因子(RUNX2、OPN)的表达。设计LncRNA-DANCR特异性siRNA转染糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞,成骨诱导3 d后,采用qRT-PCR、Western blot和碱性磷酸酶染色检测Wnt信号分子β-catenin、成骨转录因子(RUNX2、OPN)的表达以及成骨能力改变。结果与结论:(1)成骨诱导3 d后,糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞的LncRNA-DANCR表达水平显著高于正常对照小鼠脂肪干细胞,Wnt信号分子β-catenin和成骨转录因子RUNX2、OPN的表达显著低于正常对照小鼠脂肪干细胞;(2)siRNA转染糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨诱导3 d后,β-catenin以及RUNX2、OPN显著高表达,成骨能力增强;(3)结果表明,LncRNA-DANCR通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞的成骨能力,沉默LncRNA-DANCR可恢复其成骨能力。

摘要： 目的:探讨地塞米松(Dex)对脂多糖(LPS)引起的炎症状态下人牙周膜干细胞骨向分化过程的影响及其可能的分子机制。方法:体外组织块法培养人牙周膜干细胞,并进行干细胞功能鉴定,取生长状况良好的第3代牙周膜干细胞,分为4组,正常对照组、1×10^(-8)mol/L Dex组、10μg/mL LPS组、1×10^(-8)mol/L Dex+10μg/mL LPS组。培养7 d后Elisa法检测炎症因子IL-6的表达情况;qRT-PCR检测骨相关基因ALP、RUNX-2、BSP表达水平;培养21 d后茜素红染色观察钙化结节形成情况;Western blot检测核蛋白中p65表达情况。结果:成功分离培养的人牙周膜干细胞,具有克隆形成能力以及多向分化的潜能;Elisa检测结果显示,LPS组IL-6的表达水平升高(P<0.05),Dex+LPS组IL-6的表达水平较LPS组降低(P<0.05);qRT-PCR结果显示Dex组骨相关基因ALP、RUNX-2、BSP表达水平上调(P<0.05),Dex+LPS组ALP、RUNX-2、OPN表达水平较Dex组下调(P<0.05);茜素红染色结果显示,Dex组钙化结节最多,Dex+LPS组次之,LPS组与空白对照组无钙化结节形成;Western blot检测结果显示,核蛋白中LPS组p65表达量较高(P<0.05),Dex+LPS组p65表达较LPS组降低(P<0.05)。结论:Dex具有促进牙周膜干细胞成骨分化及抗炎的作用,其可能是由于抑制了NF-κB信号通路的关键分子p65入核降低了炎症反应的发生。

摘要： 目的:研究SIRT1对人乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨分化效能的影响。方法:选取特异性SIRT1激活剂SRT1720和抑制剂EX527,预处理SHEDs 3 d后作为工作细胞用于实验。CCK-8实验检测SRT1720和EX527与SHEDs共培养1、2、3、7 d后的细胞增殖能力变化。筛选出最佳浓度为0.5μmol/L的SRT1720和EX527溶液,利用成骨诱导培养基诱导SHEDs骨向分化。通过碱性磷酸酶染色及定量检测,茜素红矿化结节染色等方法分别检测早、晚期成骨分化,通过RT-PCR检测骨向分化标志物ALP、Runx2、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白以及SIRT1、PPAR-γ等相关基因及蛋白表达水平,研究SIRT1调控SHEDs体外骨向分化的可能机制。结果:SIRT1激活剂组骨向分化标志物基因mRNA较SIRT1抑制剂组增强,表明随着SIRT1表达上调,SHEDs的成骨分化效能也一并上调,而PPAR-γ受体相应下调。结论:SIRT1的表达与SHEDs的骨向分化能力呈正相关,SIRT1促进骨向分化的作用与BMP信号通路中的PPAR-γ受体下调密切相关。

摘要： 目的观察壮骨止痛胶囊调控自噬相关蛋白Beclin1、p62、LC3对去卵巢雌性大鼠骨向分化的影响。方法去除大鼠双侧卵巢进行造模,造模成功后分为模型组、壮骨止痛胶囊组、雷帕霉素(RAPA)组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,另设空白组、假手术组(仅去除卵巢周围相应体积脂肪),每组7只。通过骨髓间充质干细胞(BMMSCs)原代培养测定生长曲线并检测其碱性磷酸酶(ALP)活力,通过免疫组织化学染色法分析股骨Beclin1、LC3及p62蛋白的表达,酶联免疫分析法检测血清PPAR-γ的表达。结果①与空白组比较,假手术组各项指标表达差异无统计学意义(P>0.05);②与假手术组相比,模型组各项指标均有显著差异(P0.05)。结论壮骨止痛胶囊通过脂向分化的自噬抑制作用促进成骨。

摘要： 目的研究TNF-α刺激下人牙周膜干细胞骨向分化过程中长链非编码RNA的表达情况,探索长链非编码RNA H19在其中发挥的功能。方法选用人牙周膜干细胞作为研究对象,采用流式细胞术检测人牙周膜细胞表面分子STRO-1、CD105、CD90、CD31、CD14、CD45的表达情况。实验分为正常对照组(正常培养液培养)和TNF-α处理组(含10 ng/ml TNF-α的培养液培养),并对两组细胞进行成骨诱导,7 d后碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞ALP表达的情况,real time PCR检测成骨相关基因Runx-2、OPN、ALP以及H19、TCF1 mRNA的表达情况。正常牙周膜细胞经过TNF-α处理后,实验分为对照组、空转组和转染组(转染慢病毒载体H19)。real time PCR检测H19转染效率以及转染后成骨相关基因Runx-2、OPN、ALP和TCF1 mRNA的水平。结果流式细胞仪检测结果显示:牙周膜干细胞表型分子STRO-1细胞百分比为34.3%,CD105细胞百分比为98.0%,CD90细胞百分比为98.0%,CD31细胞百分比为1.6%,CD14细胞百分比为2.4%,CD45细胞百分比为1.4%。牙周膜干细胞成骨诱导7 d后,TNF-α处理组较正常对照组碱性磷酸酶染色变浅。real time PCR检测结果表明,成骨诱导后TNF-α处理组Runx-2、OPN、ALP mRNA较正常对照组的表达降低(P<0.05),H19、TCF1的mRNA表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。慢病毒转染H19后,转染组H19 mRNA表达量明显较对照组和空转组升高,Runx-2、OPN、ALP、TCF1 mRNA表达量上调(P<0.05)。结论TNF-α可能通过影响H19的功能抑制人牙周膜干细胞的骨向分化。

摘要： 目的通过体外培养MC3T3-E1细胞,分析其在高糖微环境与糖基化终末产物(AGEs)刺激下骨向分化过程的差异情况,以期探索临床上糖尿病患者骨质疏松的可能原因。方法体外培养MC3T3-E1细胞,分别对正常对照组(正常培养液培养)、高糖实验组(含培养液中葡萄糖浓度分别为8.8 mM、25 mM)、高糖AGEs组(高糖培养液中含AGEs浓度为10 ng/μL)进行成骨诱导,real time PCR检测成骨相关基因ALP、BSP、OPN、SP7 mRNA的表达,western-blot检测Runx-2以及WNT信号通路关键分子β-catenin的表达。结果成骨诱导7天后,与对照组相比,高糖实验组ALP染色更深,矿化结节形成更多,ALP、BSP、OPN、SP7基因水平以及Runx-2蛋白水平均上调;含AGEs的高糖实验组的ALP基因表达水平显著低于不含AGEs的高糖诱导组;细胞培养14天后,8.8 mM高糖诱导的AGEs刺激组的ALP和BSP、SP7基因表达水平显著降低,Runx-2、β-catenin的蛋白水平表达明显降低。结论高糖培养条件下,AGEs可能通过下调β-catenin蛋白的表达,从而影响了MC3T3-E1细胞的骨向分化。

摘要： 通过体外培养前成骨细胞MC3 T3-E 1细胞,加入不同浓度锶(Sr)与淫羊藿苷(ICA)处理,在第1、4、7和11天时,通过荧光显微镜观察细胞形态并对细胞计数,通过CCK-8法检测不同浓度Sr与ICA对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖活性的影响.通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测(第4和7天)及茜素红S染色(第21天),分析不同浓度Sr与ICA对MC3 T3-E 1细胞骨向分化的影响.结果显示,与其他组比较,S1I2组(80 mg/L Sr+7×10-2 mg/L ICA)在荧光显微镜下细胞数量最多,细胞增殖活性最强,并显示出最高的ALP活性和更多地红染的矿化结节.说明适宜浓度的Sr与ICA联合应用可有效促进前成骨细胞MC3 T3-E 1细胞增殖及骨向分化.

摘要： 目的 探讨miR-4319对强直性脊柱炎(AS)成纤维细胞骨向分化的影响机制.方法 原代分离培养AS成纤维细胞和正常成纤维细胞;脂质体法将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3(TNFAIP3)组(转染pcDNA-TNFAIP3)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-4319组(转染miR-4319 mimics)、miR-4319+pcDNA组(共转染miR-4319 mimics和pcDNA)、miR-4319+pcDNA-TNFAIP3组(共转染miR-4319 mimics和pcDNA-TNFAIP3)转染至AS成纤维细胞.实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-4319、TNFAIP3的表达;Western blot检测细胞TNFAIP3蛋白;双荧光素酶报告实验、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验、RNA下拉(RNA pull down)实验检测miR-4319与TNFAIP3的靶向关系;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒、羟脯氨酸检测试剂盒、放免法骨钙素检测试剂盒检测成骨标志物ALP、胶原、骨钙素的含量.结果 与正常成纤维细胞相比,AS成纤维细胞中miR-4319表达显著升高,TNFAIP3表达显著降低(P<0.05),并且miR-4319靶向结合TNFAIP3.过表达TNFAIP3能上调AS成纤维细胞ALP、胶原、骨钙素的含量,而过表达miR-4319则可抑制AS成纤维细胞ALP、胶原、骨钙素的含量.过表达TNFAIP3还可部分逆转过表达miR-4319对AS成纤维细胞ALP、胶原、骨钙素含量的调控.结论 miR-4319可抑制AS成纤维细胞的骨向分化,其机制与miR-4319靶向TNFAIP3有关.

摘要： 目的 探索钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的作用.方法 贴壁法分离BMSCs,取第3代BMSCs加入10-5 mol/L BMP9在不同时间点观察Orai1 mRNA表达;Orai1基因敲减后利用RT-qPCR和Western blot检测转染效果;利用茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色观察BMP9诱导BMSCs骨向分化效果,RT-qPCR检测骨性标志物RUNX2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)基因表达.将细胞复合在骨组织工程支架材料羟基磷灰石/聚乳酸/壳聚糖(hydroxyapatite/PLA/chitosan)植入裸鼠皮下,4周后通过HE染色和Masson染色观察体内成骨效果.结果 BMP9诱导第5天开始Orai1 mRNA表达逐渐升高(P<0.05);基因敲减后Orai1基因和蛋白表达显著降低(P<0.05);Orai1基因敲减后成骨效果显著下降(P<0.05),并且骨性标志物RUNX2、OPN和OCN基因表达显著下降(P<0.05);过表达BMP9能显著提高体内BMSCs异位成骨能力,Orai1敲减后显著抑制了这一效果(P<0.05).结论 BMP9促进BMSCs骨向分化,可能是通过调控Orai1发挥效应.

摘要： 目前在临床上因肿瘤、炎症和外伤等造成的骨缺损非常常见。骨组织工程成为目前骨组织修复再生的研究热点。环氧二十碳三烯酸（epoxyeicosatrienoic acids，EETs）通过细胞色素P450催化代谢花生四烯酸产生，在肝、肾、肠、脑和脉管系统中水平较高，具有抗炎，抑制破骨，促进细胞迁移，改善微环境促进血管新生从而促进组织器官再生等重要的生物学功能。通过添加可溶性环氧化物水解酶抑制剂（soluble epoxide hydrolaseinhibitor，s EHi）抑制EETs分解，提高内源性EETs水平来研究s EHi对牙髓干细胞（DPSCs）骨向分化的影响，为骨缺损的修复再生提供新思路，为临床骨相关疾病的治疗开辟新的途径。

摘要： 目的：牙源性间充质干细胞是间充质干细胞(MSCs)的成员之一,具有自我更新及多向分化潜能,在牙齿形成和矿化过程中发挥重要作用.有多种基因和信号通路调控其分化,但机制尚不清楚.在对牙周膜干细胞(PDLSC)和脐带干细胞(WJCMSC)的基因芯片对比分析中首次发现SHANK2在前者中有更高表达,SHANK2是SHANK家族成员之一,关于SHANK2的研究目前集中在神经系统领域,在口腔领域还未见报道.牙源性间充质干细胞包括多个成员,其中根尖牙乳头干细胞具有的高增殖潜能,使其在组织再生,尤其是牙根再生中发挥重要作用.本研究揭示了SHANK2对根尖牙乳头干细胞牙向/骨向分化的影响. 材料与方法：体外实验利用real-time RT-PCR检测了SHANK2在各间充质干细胞中的表达.通过shRNA的方法将根尖牙乳头干细胞(SCAPs)中的SHANK2沉默,并用real-time RT-PCR和Western Blot检测了沉默效果.体外对SCAPs进行牙向/骨向分化诱导,进行碱性磷酸酶染色及活性检测,茜素红染色,钙离子浓度测定等,检测了牙本质涎磷蛋白(DSPP),牙本质基质蛋白1(DMP1),及成骨相关转录因子RUNX2,OSX的表达.体内实验将SCAP植入裸鼠皮下,检测了SHANK2沉默对SCAPs体内成牙样/骨样组织的能力的影响. 结果：相较于其他来源的MSCs,SHANK2在牙源性MSCs中显著高表达;SHANK2沉默会抑制SCAPs的成骨分化能力,并抑制DSPP,DMP1,RUNX2和OSX的表达;SHANK2沉默会抑制SCAPs在体内的成牙样/骨样结构的能力. 结论：本研究揭示了SHANK2沉默会抑制SCAPs的牙向/骨向分化能力,发现了SHANK2在口腔领域的新功能,为牙源性间充质干细胞的分子调控机制提供了新的信息,为牙齿再生及组织工程修复提供了新的理论依据.

摘要： 中医学理论认为"肾藏精,主骨生髓",骨的生长与肾关系密切.近年来许多学者从"肾主骨"的理论出发,探讨补肾方药促进骨髓间充质干细胞骨向分化的作用.本文就此方面的研究进行了系统的回顾与总结，骨髓间充质干细胞(BMSCs)，是骨髓中除造血干细胞以外的一类具有高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，本文为探讨中医补肾方对其发生作用的药理学机制，分别研究了单味补肾中药及其有效成分和补肾中药复方对其的成骨分化的影响，并指出目前对于补肾方药促进成骨分化主要集中在检测一些成骨标志物对其产生具体作用的相关信号通路研究较少，而且研究多基于自拟方和临床方，还缺乏对经典补肾方的研究。

摘要： 中医理论认为,肾藏精,生髓主骨,肾中精气的盛衰能够决定骨骼的强弱,影响骨的代谢。现代医学显示骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,尤其是其骨向分化潜能与骨髓的成骨能力有密切关系。实验显示补肾中药有利于骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化。根据肾主骨生髓而采用补肾为主的临床治疗骨代谢疾病常常取得较好疗效。本文试从理论、临床和实验三个方面对肾主骨生髓理论与骨髓问充质干细胞骨向分化进行分析,提示其相关性,以期为肾本质及补肾中药研究探讨一种思路。

摘要： 牙齿缺失是口腔颌面部的常见病，牙再生是未来的治疗方向，而微环境是影响再生效果的关键因素，因此，如何在颌骨微环境中诱导干细胞牙向分化，抑制骨向分化是提高生物牙根再生成功率的关键。基于牙齿发生发育进程及导致牙齿发育畸形的基因表达、调控及作用机制，可以发现在颌骨微环境中控制细胞牙向分化的关键基因及分子机制。课题组前期基于 OFCD 综合征的研究发现 BCOR/BCL6/KDM2B 蛋白复合体通过调控下游基因 AP2a 组蛋白的甲基化，负向调控 AP2a 的表达，从而促进 MSCs 的成骨/成牙分化功能。另外，OFCD 患者和正常人 SCAPs 的基因芯片筛查发现 BCOR 突变导致同源盒转录因子 BARX1 表达下调，而 BARX1 在牙齿发育中起着重要的作用，提示 BARX1 可能与干细胞功能调控密切相关。本研究旨在揭示 BCOR/BCL6/KDM2B 蛋白复合体的下游基因BARX1 在间充质干细胞骨向、牙向分化及牙齿组织再生中的功能及其调控机制。

摘要： 目的：从基因角度比较分析体内根尖牙乳头组织与体外培养的根尖牙乳头干细胞之间的表达差异,探讨微环境中生长因子对根尖牙乳头干细胞生物学功能的调控作用. 方法：通过基因芯片及生物信息学分析的方法筛选出根尖牙乳头干细胞微环境中的差异基因,并从中挑选候选基因-生长因子BMP6进行功能研究,通过ALP活性检测、CCK8及CFSE增殖检测、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨及成牙本质分化相关基因的表达研究生长因子BMP6对根尖牙乳头干细胞体外增殖分化能力的影响. 结果：根尖牙乳头组织与根尖牙乳头干细胞之间有2325个差异基因,其中BMP6显著下调.浓度为20ng/ml BMP6可显著促进根尖牙乳头干细胞的ALP活性、体外增殖矿化能力及成骨及成牙本质分化相关基因的表达. 结论：微环境中的生长因子BMP6可促进根尖牙乳头干细胞体外增殖及成骨/成牙分化功能.BMP6可作为候选的细胞因子为体外应用细胞条件培养液模拟微环境调节干细胞功能提供参考,促进根尖牙乳头干细胞介导的组织再生.

摘要： 目的：从基因角度比较分析体内根尖牙乳头组织与体外培养的根尖牙乳头干细胞之间的表达差异,探讨微环境中生长因子对根尖牙乳头干细胞生物学功能的调控作用. 方法：通过基因芯片及生物信息学分析的方法筛选出根尖牙乳头干细胞微环境中的差异基因,并从中挑选候选基因-生长因子BMP6进行功能研究,通过ALP活性检测、CCK8及CFSE增殖检测、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨及成牙本质分化相关基因的表达研究生长因子BMP6对根尖牙乳头干细胞体外增殖分化能力的影响. 结果：根尖牙乳头组织与根尖牙乳头干细胞之间有2325个差异基因,其中BMP6显著下调.浓度为20ng/ml BMP6可显著促进根尖牙乳头干细胞的ALP活性、体外增殖矿化能力及成骨及成牙本质分化相关基因的表达. 结论：微环境中的生长因子BMP6可促进根尖牙乳头干细胞体外增殖及成骨/成牙分化功能.BMP6可作为候选的细胞因子为体外应用细胞条件培养液模拟微环境调节干细胞功能提供参考,促进根尖牙乳头干细胞介导的组织再生.

摘要： 目的：从基因角度比较分析体内根尖牙乳头组织与体外培养的根尖牙乳头干细胞之间的表达差异,探讨微环境中生长因子对根尖牙乳头干细胞生物学功能的调控作用. 方法：通过基因芯片及生物信息学分析的方法筛选出根尖牙乳头干细胞微环境中的差异基因,并从中挑选候选基因-生长因子BMP6进行功能研究,通过ALP活性检测、CCK8及CFSE增殖检测、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨及成牙本质分化相关基因的表达研究生长因子BMP6对根尖牙乳头干细胞体外增殖分化能力的影响. 结果：根尖牙乳头组织与根尖牙乳头干细胞之间有2325个差异基因,其中BMP6显著下调.浓度为20ng/ml BMP6可显著促进根尖牙乳头干细胞的ALP活性、体外增殖矿化能力及成骨及成牙本质分化相关基因的表达. 结论：微环境中的生长因子BMP6可促进根尖牙乳头干细胞体外增殖及成骨/成牙分化功能.BMP6可作为候选的细胞因子为体外应用细胞条件培养液模拟微环境调节干细胞功能提供参考,促进根尖牙乳头干细胞介导的组织再生.

摘要： 目的：从基因角度比较分析体内根尖牙乳头组织与体外培养的根尖牙乳头干细胞之间的表达差异,探讨微环境中生长因子对根尖牙乳头干细胞生物学功能的调控作用. 方法：通过基因芯片及生物信息学分析的方法筛选出根尖牙乳头干细胞微环境中的差异基因,并从中挑选候选基因-生长因子BMP6进行功能研究,通过ALP活性检测、CCK8及CFSE增殖检测、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨及成牙本质分化相关基因的表达研究生长因子BMP6对根尖牙乳头干细胞体外增殖分化能力的影响. 结果：根尖牙乳头组织与根尖牙乳头干细胞之间有2325个差异基因,其中BMP6显著下调.浓度为20ng/ml BMP6可显著促进根尖牙乳头干细胞的ALP活性、体外增殖矿化能力及成骨及成牙本质分化相关基因的表达. 结论：微环境中的生长因子BMP6可促进根尖牙乳头干细胞体外增殖及成骨/成牙分化功能.BMP6可作为候选的细胞因子为体外应用细胞条件培养液模拟微环境调节干细胞功能提供参考,促进根尖牙乳头干细胞介导的组织再生.

摘要： 目的：从基因角度比较分析体内根尖牙乳头组织与体外培养的根尖牙乳头干细胞之间的表达差异,探讨微环境中生长因子对根尖牙乳头干细胞生物学功能的调控作用. 方法：通过基因芯片及生物信息学分析的方法筛选出根尖牙乳头干细胞微环境中的差异基因,并从中挑选候选基因-生长因子BMP6进行功能研究,通过ALP活性检测、CCK8及CFSE增殖检测、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨及成牙本质分化相关基因的表达研究生长因子BMP6对根尖牙乳头干细胞体外增殖分化能力的影响. 结果：根尖牙乳头组织与根尖牙乳头干细胞之间有2325个差异基因,其中BMP6显著下调.浓度为20ng/ml BMP6可显著促进根尖牙乳头干细胞的ALP活性、体外增殖矿化能力及成骨及成牙本质分化相关基因的表达. 结论：微环境中的生长因子BMP6可促进根尖牙乳头干细胞体外增殖及成骨/成牙分化功能.BMP6可作为候选的细胞因子为体外应用细胞条件培养液模拟微环境调节干细胞功能提供参考,促进根尖牙乳头干细胞介导的组织再生.

摘要： 一种基于弓形虫外分泌蛋白的成骨诱导分化培养基、制备方法及成骨诱导分化方法，其成骨诱导分化培养基含有弓形虫外分泌蛋白。成骨诱导分化培养基还含有地塞米松、L‑抗坏血酸、β‑甘油磷酸钠和完全培养基。含量如下：弓形虫外分泌蛋白：0.5mg/mL～15mg/mL；地塞米松：80nM～120nM；L‑抗坏血酸：30mM～80mM；β‑甘油磷酸钠：3mM～15mM。本发明的弓形虫外分泌蛋白作为成骨诱导培养基添加成分可大幅提高间充质干细胞成骨分化效果。

摘要： 本发明提供了一种长链非编码RNA在干细胞成脂分化和成骨分化中的作用，属于干细胞技术领域。本发明通过实验证明，在骨髓间充质干细胞成脂分化的过程中，LINC02075的表达量显著升高，抑制LINC02075能够显著的抑制成脂分化相关基因PPARγ、C/EBPα和AP2的mRNA和蛋白表达来抑制骨髓间充质干细胞的成脂分化。同时，本发明证明抑制LINC02075能够显著的促进成骨分化相关基因RUNX2、ALP和OCN的mRNA和蛋白表达来促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

摘要： 本发明涉及一种高效诱导脂肪干细胞骨分化的培养基及制备和诱导分化方法及应用。本发明提供了SAFit2在制备高效诱导脂肪干细胞骨分化的培养基中的应用。小分子化合物SAFit2的加入能够大大提高脂肪干细胞向骨细胞分化的效率。

摘要： 本发明公开了一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方法，属于细胞生物学技术领域。本发明构建了含有Sema3A基因序列的重组质粒，通过将Sema3A重组质粒和辅助包装质粒转染进入293T细胞获得Sema3A慢病毒载体，慢病毒载体在polybrene的协助下将Sema3A基因导入脂肪干细胞，显著地促进了脂肪干细胞的成骨分化，同时也抑制了脂肪干细胞向成脂方向的分化，导入Sema3A基因可以更好地将脂肪干细胞应用于促进骨缺损愈合和种植体骨结合，充分发挥脂肪干细胞来源广泛，易于获取的优点。

摘要： 本发明公开了一种成骨诱导剂及在脂肪间充质干细胞成骨诱导分化中的应用。RUNX2是成骨分化过程中关键的调控因子，能够调控众多基因的转录，RUNX2缺失会导致成骨细胞的分化完全被抑制。本发明发现，川白芷素可显著提高脂肪间充质干细胞成骨分化调控因子RUNX2的表达水平，为有效的RUNX2表达激活剂；将川白芷素作用于脂肪间充质干细胞，茜素红染色结果发现川白芷素可以显著提高细胞钙矿化结节程度，表明川白芷素对ADSCs成骨分化具有显著的诱导作用。

摘要： 本发明公开一种调控细胞成骨分化的转录因子及成骨分化细胞，转录因子为Zfp260，细胞为Krt14阳性细胞或Krt14/Ctsk双阳性细胞，成骨分化细胞的方法包括以下步骤：S1、筛选Krt14阳性细胞或Krt14/Ctsk双阳性细胞作为骨分化细胞；S2、将步骤S1筛选的骨分化细胞植入支持载体的内部；S3、在所述支持载体的内部培养骨分化细胞，最终形成骨骼；综上所述，本发明提供了促进骨分化、再生的因子和方法。

摘要： 一种基于弓形虫外分泌蛋白的成骨诱导分化培养基、制备方法及成骨诱导分化方法，其成骨诱导分化培养基含有弓形虫外分泌蛋白。成骨诱导分化培养基还含有地塞米松、L‑抗坏血酸、β‑甘油磷酸钠和完全培养基。含量如下：弓形虫外分泌蛋白：0.5mg/mL～15mg/mL；地塞米松：80nM～120nM；L‑抗坏血酸：30mM～80mM；β‑甘油磷酸钠：3mM～15mM。本发明的弓形虫外分泌蛋白作为成骨诱导培养基添加成分可大幅提高间充质干细胞成骨分化效果。

摘要： 本发明涉及一种高效诱导脂肪干细胞骨分化的培养基及制备和诱导分化方法及应用。本发明提供了SAFit2在制备高效诱导脂肪干细胞骨分化的培养基中的应用。小分子化合物SAFit2的加入能够大大提高脂肪干细胞向骨细胞分化的效率。

摘要： 本发明提供了一种长链非编码RNA在干细胞成脂分化和成骨分化中的作用，属于干细胞技术领域。本发明通过实验证明，在骨髓间充质干细胞成脂分化的过程中，LINC02075的表达量显著升高，抑制LINC02075能够显著的抑制成脂分化相关基因PPARγ、C/EBPα和AP2的mRNA和蛋白表达来抑制骨髓间充质干细胞的成脂分化。同时，本发明证明抑制LINC02075能够显著的促进成骨分化相关基因RUNX2、ALP和OCN的mRNA和蛋白表达来促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

摘要： 本发明公开了一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方法，属于细胞生物学技术领域。本发明构建了含有Sema3A基因序列的重组质粒，通过将Sema3A重组质粒和辅助包装质粒转染进入293T细胞获得Sema3A慢病毒载体，慢病毒载体在polybrene的协助下将Sema3A基因导入脂肪干细胞，显著地促进了脂肪干细胞的成骨分化，同时也抑制了脂肪干细胞向成脂方向的分化，导入Sema3A基因可以更好地将脂肪干细胞应用于促进骨缺损愈合和种植体骨结合，充分发挥脂肪干细胞来源广泛，易于获取的优点。