人胱蛋白酶抑制剂C的原核表达及其免疫反应性研究

摘要

目的 获得具有免疫反应性的人胱蛋白酶抑制剂C(Cys C)重组蛋白.方法 从Hela细胞提取总RNA,采用RTPCR扩增获得人Cys C基因片段,与质粒pET30a连接构建重组表达载体,转化大肠埃希菌Ecoli BL21 (DE3)并加入IPTG诱导表达,表达产物经凝胶层析复性和亲和层析纯化后,用间接ELISA检测纯化后的Cys C重组蛋白对重组Cys C免疫小鼠血清的免疫反应性.结果 成功构建了重组表达载体pET30a-CysC,诱导表达出约19 ku的重组蛋白,经复性纯化后获得纯度达90％以上的目的蛋白,与重组Cys C免疫小鼠血清具有良好的免疫反应性.结论 在原核系统成功表达了人Cys C重组蛋白,而且具有良好的免疫反应性.