瘀胆血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究

摘要

目的 探讨骨髓问充质干细胞(MSCs)体外诱导其分化为肝细胞的可行性.方法 分离、纯化并鉴定大鼠骨髓MSCs,制备正常及瘀胆大鼠血清,取第3代MSCs分组培养:A组:DMEM+10%FBS;B组:肝细胞生长培养基(HGM)+5%FBS:C组:HGM+5%正常大鼠血清;D组:HGM+5%瘀胆大鼠血清;E组:HGM+5%瘀胆大鼠血清+25μg/L HGF.观察各组细胞形态变化.MTT法测定细胞生长曲线,采用RT-PCR检测甲胎蛋白(AFP)和细胞角蛋白18(CK18)的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白(ALB)的含量.结果 培养过程中,D、E组出现多角形及双核细胞,A、B、C组细胞形态无明显变化.生长曲线显示细胞生长速度C组最快,D、E组均较B组快(P<0.05).D、E组于诱导第7,14天出现AFP mRNA阳性表达,第14,21天出现CK18 mR-NA阳性表达,D、E组上清液中白蛋白浓度随诱导时间延长逐渐升高,且E组高于D组(P<0.05).A、B、C组未见AFP、CK18表达及白蛋白浓度变化.结论 正常大鼠血清能明显促进MSCs的增殖;瘀胆血清对MSCs有一定促增殖作用,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用HGF能提高分化率.