人巨细胞病毒UL55编码蛋白结合蛋白的筛选与鉴定

摘要

从人胎脑cDNA文库中筛选和鉴定出与人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV) UL55编码蛋白结合的蛋白.将UL55基因编码区克隆到诱饵载体pGBKT7中,在证实UL55蛋白不具有自激活作用的前提下,采用Match-maker GAL酵母双杂交系统筛选人胎脑cDNA文库中与UL55蛋白结合的宿主蛋白,用酵母双杂交回转实验验证UL55蛋白与获得的蛋白结合的可靠性.将酵母双杂交筛选出的文库蛋白烯醇化酶1(enolase1,ENO 1)构建到pGEX-4T-2载体上,利用GST pull-down技术体外验证ENO 1与HCMV UL55蛋白的结合.并依据所筛选出蛋白的生物学功能分析UL55蛋白可能的生物学功能.结果显示有10种蛋白与HCMV UL55编码蛋白结合.应用GST pull-down技术检测到ENO 1与HCMV UL55相互结合的蛋白条带.成功地筛选出10种与UL55蛋白相互结合的宿主蛋白,GST pull-down实验进一步表明ENO 1可以与HCMV UL55蛋白直接结合,为进一步研究UL55蛋白的功能提供了新的线索.