4种冷冻保护剂对人指固有神经的玻璃化保存效果

摘要

目的 评估二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)、甘油、丙二醇、乙二醇玻璃化法保存人指固有神经中的保护效果,筛选合适的人指固有神经冷冻保护剂。方法 取截肢手术后患者放弃肢体的指固有神经,分为实验组(30%DMSO组、甘油组、乙二醇组、丙二醇组)和空白对照组进行玻璃化法于液氮(-196℃)中保存3周。复温后进行光学显微镜观察、共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测、指固有神经片段的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)检测。结果 光镜观察:空白对照组神经鞘膜结构模糊,神经纤维排列疏松、紊乱;实验组神经鞘膜较为完整,神经纤维排列相对整齐、紧凑。LSCM结果:采用钙黄绿素-AM (calcein-AM)和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光染色后空白对照组神经纤维绿色荧光强度较弱,红色荧光强度较强。实验组绿色荧光较空白对照组均增强,红色荧光强度均减弱。ELISA检测结果:空白对照组12.95±3.03pg/ml、乙二醇112.64±3.54pg/ml、30%DMSO109.51±9.98pg/ml、甘油61.47±3.34pg/ml、丙二醇62.53±3.64pg/ml。结论4种冷冻保护剂对人指固有神经的玻璃化法保存均有保护作用,其中乙二醇效果最佳,更适合用于人指固有神经玻璃化保存。