白介素1受体相关激酶4重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4的构建及转染

摘要

目的 构建重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4并检验其在H9c2细胞中的表达.方法 在全球科学家质粒共享非盈利组织Addgene申请到pDONR223-IRAK4质粒菌种,摇菌提取质粒后测序.设计引物将目的片段扩增并跑胶回收.将目的片段PCR扩增产物和空质粒pcDNA3.1采用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,构建重组表达质粒.将重组质粒使用两种转染试剂转染人H9c2细胞中,并借助Western blot法检测IRAK4蛋白在H9c2细胞中的表达.结果 重组过表达质粒经菌落PCR、序列测定证实,扩增基因片段IRAK4与基因数据库中序列一致,并且含有终止密码子.转染人H9c2细胞中能够过表达,表明IRAK4重组过表达质粒构建成功.结论 成功构建IRAK4基因过表达重组质粒,获得外源性IRAK4转染的H9c2细胞.