25-羟维生素D抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞释放炎性因子的相关性研究

摘要

目的目前维生素D在类风湿关节炎(RA)患者中的作用机制尚未明确。研究RA患者外周血清25-羟维生素D[25(OH)D]浓度与疾病活动度的关系;明确体外给予活性维生素D[1,25(OH)2 D 3,VD]干预是否可抑制人类滑膜成纤维细胞系(MH7A)炎性细胞因子的释放及探讨可能的抗炎机制。方法回顾分析2019年5月至2020年5月南京市第一医院风湿免疫科住院的类风湿关节炎患者血清93份(RA组),以及同期正常体检者血清48份(健康组),患者血清为RA组,健康体检者血清为健康组。用质谱法检测血清25(OH)D的浓度值,比较两组值之间的差异。并记录以上93例住院患者的临床指标,包括:类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、血沉、C反应蛋白、血钙、压痛关节数、肿胀关节数和25(OH)D水平。按疾病活动度DAS28评分将93份数据分为缓解组、中低活动组和高活动组;按血清25(OH)D浓度将93份数据分为25(OH)D正常组、25(OH)D不足组和25(OH)D缺乏组。统计不同疾病活动度与不同血清25(OH)D浓度及临床指标之间的相关性。体外培养MH7A细胞,将实验分为3组,对照组:不加任何处理;刺激组:用脂多糖(LPS,100 ng/mL)刺激细胞5 h,模拟RA的体外炎症环境;干预组:将LPS和VD(10-8 mol/L)与细胞共培养24 h。采用RT-qPCR和ELISA法检测MH7A细胞产生炎性细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)mRNA和蛋白水平以及miR-155水平,统计分析3组之间炎性因子及miR-155表达的差异。结果RA组血清25(OH)D水平[(15.8±6.01)ng/mL)]较健康组[(30.5±3.80)ng/mL]明显降低(P<0.01)。疾病高活动组的血清25(OH)D水平低于缓解组和中低活动组(P<0.05),而ESR、CRP、TJC和SJC高于缓解组和中低活动组(P<0.05);中低活动组的血清25(OH)D水平低于缓解组(P<0.05),而ESR、CRP、TJC和SJC高于缓解组(P<0.05)。血清25(OH)D缺乏组的DAS28、ESR、CRP、TJC和SJC高于另外2组(P<0.05)。血清25(OH)D与高ESR(r=-0.485,P<0.01);高CRP(r=-0.667,P<0.01);低血Ca(r=0.548,P<0.01);高TJC(r=-0.563,P<0.01);高SJC(r=-0.466,P<0.01)及高DAS28评分(r=-0.761,P<0.01)相关。LPS刺激MH7A细胞后,与对照组比较,刺激组炎性细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)的mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01);与刺激组比较,干预组的炎性细胞因子的mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01)。RT-qPCR检测,与对照组miR-155表达(1.00±0.00)比较,刺激组(3.86±0.07)升高(P<0.01),而干预组较刺激组表达(2.22±0.10)被下调(P<0.01)。结论RA患者血清25(OH)D水平较正常健康人群明显偏低,且与疾病活动度负相关。给予外源性VD干预后可抑制MH7A产生的炎性细胞因子水平,并下调miR-155的表达。