MEK信号通路对H_2O_2诱导细胞角蛋白7在细胞中表达与定位的影响

摘要

目的细胞角蛋白7(Cytokeratin-7,Krt7)与肿瘤发展以及炎症反应密切相关,氧化应激在此过程中扮演着重要的角色,文中旨在通过构建小鼠Krt7的真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达、定位以及在氧化应激反应下的变化情况。方法提取C57/BL6小鼠肺组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Krt7编码序列,构建重组质粒pcDNA3-Krt7-HA。经脂质体转染NIH 3T3细胞,采用Western blot检测Krt7表达,免疫荧光检测其在细胞中的表达、定位以及在过氧化氢(H2O2)刺激下的变化情况。结果重组质粒构建成功。Western blot显示该质粒能够在NIH 3T3细胞中有效表达,免疫荧光检测表达产物主要分布在细胞质中,随着H2O2刺激时间的增加细胞内颗粒状蛋白聚集物的形成愈发明显且在60 min处发生入核现象。MEK通路抑制剂PD98059可明显抑制这一过程。结论成功构建了带HA标签的Krt7真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,H2O2诱导Krt7在NIH 3T3细胞内的形态及定位变化依赖于MEK介导的信号通路。