不同剂量柚皮素介导的促氧化作用及其对CNE2细胞生长的调控

摘要

目的：柚皮素重要的生理活性使其具有广泛的开发应用前景。文中探讨不同剂量柚皮素对人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响及其相关作用机制。方法 MTT法检测不同剂量柚皮素（0、0．005、0．01、0．02、0．04、0．06、0．08、0．1、0．2、0．4、0．8 mg/mL）作用CNE2细胞不同时间（24、48、72 h）对其细胞生长率的影响；流式细胞仪检测不同剂量柚皮素（0、0．02、0．04 mg/mL ）作用 CNE2细胞48 h 对其细胞周期的影响；采用 Hochest 33258荧光染色观察不同剂量柚皮素（0、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡形态的变化；采用Annexin V-FITC流式细胞术检测不同剂量柚皮素（0、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡率的影响；采用2，7-二氯乙酰乙酸（2，7-dichloro fluorescein diacetate ， DCFH-DA）荧光探针检测不同剂量柚皮素（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48h对其细胞内活性氧簇（reactive oxygen spe-cies， ROS）的变化；采用实时荧光定量PCR法（ real-tmie fluorescence quantitative PCR ， qPCR）检测不同剂量柚皮素（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对C-fos、Bax及Bcl-2基因mRNA表达水平的变化。结果与对照组相比，0．02、0．04 mg/mL柚皮素能引发CNE2细胞内ROS含量低水平升高，ROS的MFI分别为5186±183．50、5508±155．37，差异有统计学意义（P＜0．05），由此诱导细胞增殖调控基因C-fos表达，差异有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01），加速细胞周期运转，促进CNE2细胞分裂增殖；而0．2、0．4 mg/mL柚皮素则能引发ROS大量产生，ROS的MFI分别为10758±179．82、11241±114．45，差异有统计学意义（P＜0．01），由此诱导促凋亡基因Bax及抑制抗凋亡基因Bcl-2表达，促进CNE2细胞凋亡，差异有统计学意义（P＜0．01），有效抑制CNE2细胞增殖。结论在0．005～0．8 mg/mL剂量范围，柚皮素对CNE2细胞生长具有双向调节作用，相对较低剂量体现为一定的促癌活性，相对较高剂量则体现为强烈的抑癌活性。