应用寡核苷酸圈套技术研究胰岛素调控人α1(Ⅰ)型胶原基因转录

摘要

目的 应用寡核苷酸圈套技术研究胰岛素对人COL1A1基因转录的调控.方法 建立稳定转染pCOLH12.5质粒(含CAT基因与人COL1A1基因-2483～+42bp片段)的WI-38细胞株,加入不同剂量胰岛素,测CAT值;分别瞬时转染不同序列ssPT入克隆细胞株中,加入2.5 μmol/ml的胰岛素,测CAT值.结果 2.5 μmol/ml的胰岛素显著增加了COL1A1基因启动子活性;含sp1l位点的ssPT浓度为120 nmol/L时,受胰岛素刺激所增加的CAT值得到显著抑制,不含sp1位点的ssPT无此作用.结论 ssPT能够应用于基因转录调控的研究.胰岛素在人COL1A1基因上的反应元件可能位于启动子-129至-105区域内.