Sp1圈套寡核苷酸抑制NIH3T3细胞增殖和Ⅰ型胶原基因表达

摘要

目的:研究针对转录因子Sp1的圈套寡脱氧核苷酸(decoy ODN)对小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3）细胞增殖和Ⅰ型胶原前α1、α2基因表达的影响，探讨病理性疤痕的基因治疗。 方法:体外设计合成针对转录因子Sp1的特异性哑铃形decoyODN。用阳离子转染试剂JetPEI将ODN转染入NIH3T3细胞。分别用流式细胞仪检测ODN转染效率，激光共聚焦显微镜观察ODN在细胞中的分布，电泳迁移率变动分析(EMSA)验证ODN与Sp1的特异性结合。用WST-8检测ODN对细胞增殖的影响。用半定量PCR和荧光定量PCR检测ODN对细胞Ⅰ型胶原前α1、α2基因表达的抑制作用。 结果:转染试剂JetPEI可将哑铃形Sp1 decoy ODN高效转染进入NIH3T3细胞，转染效率达99.24％；激光共聚焦显微镜显示进入细胞的ODN呈现明显的时空分布，在转染后12h，Sp1 decoy ODN几乎全部进入细胞核内；EMSA 实验证明Sp1 decoy ODN能与蛋白特异性结合；转染100nM Sp1 decoy ODN 可抑制细胞生长，与空白对照组相比，差异有统计学意义，对细胞增殖的抑制效果在第二天、第三天最明显，抑制率分别为55％、41％；转染100nM Sp1 decoy ODN，24h后，可同时抑制Ⅰ型胶原前α1、α2 mRNA的表达，抑制效果分别为26％、34％。 结论:哑铃形decoy ODN可以通过拮抗核转录因子Sp1的活性而抑制NIH3T3细胞的增殖和Ⅰ型胶原基因的表达。