人乙醇脱氢酶ADH1C*1等位基因的克隆与鉴定

摘要

目的:克隆人乙醇脱氢酶ADH1C*1等位基因。方法:取人癌旁正常肝组织,用RT-PCR法获得ADH1C基因的cDNA,然后用双酶切得到目的基因并定向克隆到pUC19载体上。经过蓝白筛选后,用限制性酶谱和DNA测序以及BLAST对比分析进行鉴定。结果:①用RT-PCR方法扩增出与预期大小相符的ADH1C基因片段;②经蓝白筛选获得了带pUC19-ADH1C重组质粒的白色菌落;③用限制性酶谱和DNA测序并作BLAST分析证实pUC19-ADH1C*1重组质粒构建成功。结论:本实验构建的pUC19-ADH1C*1重组质粒,含有ADH1C*1结构基因的所有序列,与GeneBank数据库中的ADH1C基因的RefSeq序列比对,其碱基序列的一致性达到99%,氨基酸序列的一致性达到100%。在构建pUC19-ADH1C*1重组质粒时,采用双酶切的方法,可以很方便的定向克隆到真核表达载体中进行进一步的研究。