重组IL-33融合表达载体的构建、蛋白表达及纯化

摘要

目的:构建人白介素-33(IL-33)硫氧还蛋白融合表达载体,高效表达IL-33蛋白。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-33 cDNA;将扩增的IL-33目的基因与融合表达质粒pET102/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。结果:扩增的IL-33 cDNA大小为800bp左右。表达的IL-33融合蛋白大小为45kDa左右,Western blotting鉴定显示表达的蛋白正确,为IL-33目的蛋白。但表达的大部分蛋白为无生物学活性的包涵体,在后续对表达蛋白进行纯化的同时对蛋白进行了复性,得到了复性后具有生物学活性的IL-33蛋白。结论:成功制备了具有生物学活性的IL-33蛋白。