商陆抗病毒蛋白cDNA的植物表达载体构建及转化烟草的研究

摘要

以商陆抗病毒蛋白的cDNA序列为依据,设计特异性引物,应用PCR技术扩增出5′端含有BamHI,3′端含有KpnI限制性内切酶酶切位点的目的片段,且在序列的开始和结尾分别加入起始密码子ATG和终止密码子TAA.将该目的片段定向克隆于载体pROKII中与CaMV35S启动子和Nos末端构成植物表达载体pRPAP,通过菌落直接PCR法和酶切分析鉴定出阳性重组子,用直接导入法将其导入农杆菌EHA105,以此作为工程菌进行烟草转化.对筛选到的阳性植株随机取样进行Southern印迹分析.结果表明,PAP基因已经整合到烟草基因组中,证明载体构建成功.