龙血素A对大鼠肝星状细胞增殖及Frizzled-4受体蛋白表达的影响

摘要

目的研究WNT信号通路中卷曲蛋白-低密度脂蛋白相关蛋白复合受体（Frizzled/LRP）在体外培养活化大鼠肝星状细胞（aHSCs）中的表达及龙血素A（LoureirinA）干预对大鼠肝星状细胞（aHSC）增殖及α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1分泌的影响，探讨龙血素A抗肝纤维化的细胞分子机制．方法分离SD大鼠肝星状细胞，体外传代培养诱导细胞活化，倒置相差显微镜下观察肝星状细胞活化前后形态学变化，用不同浓度龙血素A处理活化的大鼠肝星状细胞（aHSCs）．MTT法测定龙血素A对肝星状细胞的生长抑制率；WesternBlot方法从蛋白水平检测肝星状细胞中Frizzled-4受体蛋白；Elisa测定药物干预后细胞培养上清液中α-SMA和TGFβ1的含量．结果与对照组相比，龙血素A抑制肝星状细胞增殖并有明显的时间-剂量效应关系，IC50=0.30滋g/滋L；龙血素A在蛋白水平显著下调受体蛋白Frizzled-4表达，同时抑制肝星状细胞分泌α-SMA、TGFβ1（＜0.05）．结论Frizzled-4受体蛋白在活化的大鼠肝星状细胞（aHSCs）中高表达，经龙血素A干预后，Frizzled-4表达量明显降低，细胞增殖受到抑制，α-SMA、TGFβ1合成和分泌量下降，这提示龙血素A可能与WNT信号通路调节肝纤维发生和血管新生的分子机制相关．