pEGFP/RUNX2真核表达载体的构建及细胞定位

摘要

目的克隆人RUNX2基因,构建p EGFP/RUNX2真核表达载体,并观察其在人骨肉瘤细胞Saos-2内的表达和定位。方法成骨诱导剂刺激人骨髓间充质干细胞3d后,提取总RNA进行RT-PCR,扩增全长RUNX2蛋白编码序列,经Bgl II和Sal I双酶切后,插入真核表达载体p EGFP-N1。构建好的p EGFP-RUNX2真核表达质粒经酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染Saos-2细胞,荧光显微镜观察p EGFP在细胞内的表达与定位。结果测序结果显示经PCR扩增的RUNX2编码序列完全正确,酶切显示重组质粒p EGFP-RUNX2构建成功,荧光显微镜显示融合蛋白GFP-RUNX2在细胞质与细胞核中分布,但以胞核为主。结论成功克隆RUNX2基因并构建真核表达载体,证实RUNX2蛋白定位于Saos-2细胞核,为下一步深入研究RUNX2基因的生物学功能奠定了基础。