咪康唑通过抑制PI3K/Akt/NOX4通路诱导肺鳞癌H520细胞凋亡并增敏顺铂的机制

摘要

目的:探究唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞的抑制作用和分子机制,以及其对顺铂敏感性的影响.方法:采用MTT法检测不同唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞活性的影响,筛选出效果最佳的唑类抗真菌药.通过流式细胞术分析最佳唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞凋亡及活性氧(ROS)的影响.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测最佳唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞NADPH氧化酶-4(NOX4)mRNA表达的影响.Western blot法检测p-Akt、Akt及NOX4的蛋白表达.通过裸鼠体内肿瘤模型验证最佳唑类抗真菌药及其联用顺铂后的抑瘤效果.免疫组化法检测肿瘤组织中p-Akt和NOX4蛋白的表达情况.结果:14个唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞活力均有抑制作用,且咪康唑半抑制浓度最低,选为最佳唑类抗真菌药.咪康唑能减少肺鳞癌H520细胞ROS的产生并诱导肺鳞癌H520细胞凋亡.咪康唑可抑制p-Akt及NOX4的表达,且咪康唑与PI3K/Akt通路抑制剂LY294002联用后,NOX4蛋白表达与LY294002单独给药组相比无统计学差异.咪康唑可削弱顺铂对肺鳞癌H520细胞p-Akt表达的促进作用,并可增加顺铂的敏感性.荷瘤裸鼠体内实验中,咪康唑可抑制肿瘤的生长,免疫组化结果显示,咪康唑可减少裸鼠肿瘤中NOX4和p-Akt的蛋白表达.结论:咪康唑可能通过抑制PI3K/Akt介导的NOX4的表达,诱导肺鳞癌H520细胞凋亡并增强顺铂抑制肺鳞癌H520细胞的作用.